科諾賽淺談蛋白質(zhì)純化有哪些方法

蛋白質(zhì)純化的主要方法

　　(1)根據(jù)分子大小不同的分離方法:透析和超濾(利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜的性質(zhì));梯度離心(蛋白質(zhì)在介質(zhì)中離心時(shí)，質(zhì)量和密度較高的顆粒沉降較快);凝膠過(guò)濾(一種柱色譜法)。

　　(2)溶解度差異分離:等電點(diǎn)沉淀法(由于蛋白質(zhì)分子在等電點(diǎn)時(shí)凈電荷為零，減少了分子間的靜電斥力，容易聚集沉淀，此時(shí)溶解度低);鹽析和鹽析(利用一定濃度的鹽溶液來(lái)增加或減少蛋白質(zhì)的溶解度)。

　　(3)根據(jù)電荷的不同分離方法，主要包括電泳和離子交換色譜法;

　　(4)蛋白質(zhì)的選擇性吸附分離(利用顆粒吸附力的差異達(dá)到分離的目的)。

　　(5)根據(jù)配體的特性進(jìn)行分離——親和層析(利用蛋白質(zhì)分子能與另一種稱為配體的分子特異性結(jié)合但不能共價(jià)結(jié)合的生物學(xué)特性)。

　　(6)低溫有機(jī)溶劑沉淀法:使用與水混溶的有機(jī)溶劑，甲醇、乙醇，可以降低大部分蛋白質(zhì)的溶解度，使其沉淀。這種方法比鹽析分辨率高，但蛋白質(zhì)易揮發(fā)，要在低溫下進(jìn)行。

　　蛋白質(zhì)純化注意事項(xiàng)

　　進(jìn)行任何一種蛋白質(zhì)純化時(shí)，都要時(shí)刻注意保持其穩(wěn)定性，保護(hù)其活性。需要記住一些一般預(yù)防措施，包括:

　　1.操作盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行。

　　2.不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。

　　3.適當(dāng)?shù)膒H，除非進(jìn)行聚焦層析，否則所用緩沖溶液的pH應(yīng)與pI相同，以防止蛋白質(zhì)沉淀。

　　4.使用蛋白酶抑制劑防止蛋白酶降解目標(biāo)蛋白;在細(xì)胞內(nèi)純化蛋白質(zhì)時(shí)，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA污染蛋白質(zhì)。

　　5.避免反復(fù)冷凍和攪拌樣品，以防止蛋白質(zhì)變性。

　　6.緩沖溶液的組成盡可能模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。

　　7.在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)以防止蛋白質(zhì)氧化。

　　8.加入1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑，防止重金屬對(duì)目的蛋白的損傷。

　　9.使用滅菌溶液防止微生物生長(zhǎng)。

本公司業(yè)務(wù)有：蛋白A親和層析 抗體純化,疫苗純化