肝素瓊脂糖凝膠 FF

一、肝素簡介
肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖，將它偶聯(lián)到交聯(lián)及活化的瓊脂糖凝膠上，該填料具 有很高的物理化學穩(wěn)定性。 肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、 限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子結(jié)合，所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質(zhì) 的純化。 本產(chǎn)品穩(wěn)定性好，基團脫落少，使用壽命長，使用方便，應用廣泛。

二、 親和介質(zhì)的特性

三、 適用范圍

肝素瓊脂糖凝膠用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子的分離純化。

實驗名稱：肝素瓊脂糖凝膠 FF 分離凝血酶。實驗步驟：

1、 肝素瓊脂糖凝膠 FF 裝柱，1.6′20m，柱床體積為 10ml

2、 用緩沖液 1 平衡 5 個床體積，流速為 2ml/min

3、 取活化后凝血酶粗品 200mg 溶解在 20ml 的緩沖液 1 中，用 0.45μm 的濾膜過濾， 上樣，流速為 1ml/min

4、 用緩沖液 1 再洗 5-10 個床體積，流速為 2ml/min

5、 最后緩沖液 2 進行洗脫，流速為 2ml/min，收集洗脫峰，用 SDS-PAGE 純化后的效果。

緩沖液組成：

緩沖液 1：100mM pH7.4 的 PB 緩沖液。配制：0.5M NaH2PO4 38ml，0.5M Na2HPO4 162ml，加適量水溶解后定容到 1000ml。

緩沖液 2：1：100mM pH7.4 的 PB 緩沖液。配制：0.5M NaH2PO4 38ml，0.5M Na2HPO4 162ml， 119 克 NaCl,加適量水溶解后定容到 1000ml。

四、 親和介質(zhì)應用注意事項

1、 該凝膠從冷室或冰箱中取出后最好在室溫下緩慢振搖恢復到室溫，然后再裝柱，以免產(chǎn)生氣泡影響柱效。

2、 吸附：20-50mM,pH7.4-8.0 的緩沖液，為避免離子交換的干擾，緩沖液中可以適當加50mM-100mM 的 NaCl,，最常用的為 Tris-HCl 緩沖液。

3、 洗脫：可以用 pH7.4-8.0 的緩沖液加 0.2-2M NaCl 進行階段或者線性洗脫。

4、 上樣：樣品必須與平衡柱子的緩沖液的 pH、電導相同。

5、 不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關的文獻進行。

6、 肝素瓊脂糖凝膠 FF 親和填料的再生處理方法：先用 0.1M Tris-HClpH7.0 緩沖液洗 3 個柱床體積，然后用 0.1M NaOH 含 2MNaCl 流洗 3 個床體積,最后用 20%乙醇洗 3 個床體積即可。長時間用酸堿洗填料會是填料的吸附能力下降，所以清洗要盡量縮短時間。

7、 該親和填料保存條件為 20%乙醇，+4~8℃。