豬圓環(huán)病毒純化案例分享

豬圓環(huán)病毒病，是豬群的隱形殺手，是由豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）引起的疾病，傳染速度極快，是目前給國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成經(jīng)濟損失較大的病毒性疾病之一。有效的疫苗免疫是目前最佳的防控手段。

對于動物疫苗的有效性和安全性，下游純化工藝很關(guān)鍵，今天小編給大家分享豬圓環(huán)病毒疫苗的純化方法及應(yīng)用案例。

了解病原

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV），病毒粒子較小，直徑約為17 nm?，F(xiàn)已知PCV有兩個血清型：PCV1和PCV2。PCV1為非致病性的病毒，PCV2為致病性的病毒。

PCV2病毒樣顆粒(VLPs）是重組表達的PCV2 CAP蛋白，20面體，無包膜，每個病毒顆粒由60個Cap蛋白組裝而成，分子量約為650kd，大小約為20nm。PCV2是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的首要致病因子。

純化工藝

疫苗生產(chǎn)工藝方面，大腸桿菌、昆蟲細胞/桿狀病毒表達是常用的表達系統(tǒng)。其中大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，可以在降低成本的同時，保證疫苗的免疫保護作用。

對于豬圓環(huán)病毒疫苗來說，純化后的Cap蛋白純度越高，組裝的VLPs完整度、均勻度和完成比例就會越高。然而，PCV2的分子量較大（650kd），常規(guī)的層析介質(zhì)孔道較小，大于200kd的蛋白很難進入孔道內(nèi)部，結(jié)合量極小，回收率低。

由于大腸桿菌表達系統(tǒng)菌體破碎后的雜蛋白較多，純化的難度較大，科諾賽根據(jù)豬圓環(huán)病毒的特點，經(jīng)過各種方法的測試，為客戶提供了最優(yōu)的解決方案，含有豬圓環(huán)病毒VLP顆粒的菌體破碎液，經(jīng)過離心過濾后采用超大孔層析介質(zhì)進行離子交換層析純化，一步純化即可去除蛋白中的雜質(zhì)，得到純度90%以上Cap蛋白。

應(yīng)用案例

層析填料：MoSphere 50V Q 超大孔陰離子交換層析介質(zhì)

層析柱：HiQumn CTN30

緩沖液：A液：20 mM Tris，150 mM NaCl，pH 8.5，B液：20 mM Tris，1 M NaCl，pH 8.5

樣品（大腸桿菌表達）經(jīng)澄清過濾后，采取20% B液、100% B液梯度洗脫，收集液 SDS-PAGE電泳檢測。

實驗結(jié)果：

樣品科諾賽MoSphere 50V Q超大孔離子交換層析介質(zhì)，雜蛋白去除率可達90%，Cap蛋白純度較高，完全滿足疫苗的純度要求，且適用于工業(yè)化生產(chǎn)放大。

MoSphere 50V Q產(chǎn)品特點

MoSphere 50V Q是一款超大孔離子交換層析介質(zhì)，以親水性PMMA為基質(zhì)，粒徑50μm，超大孔徑的設(shè)計打破了常規(guī)層析介質(zhì)的局限性。介質(zhì)通過專有的表面修飾技術(shù)，在親水性基質(zhì)表面鍵合離子交換官能團Q，并確保了表面離子交換層的高密度和均一性。特點如下：

》高結(jié)合載量：

載量是常規(guī)瓊脂糖介質(zhì)的10倍以上，是常規(guī)聚合物介質(zhì)的2倍；

》高回收率：

可保持大分子蛋白或病毒結(jié)構(gòu)的完整性，得到高收率、高活性的目的蛋白；

》高分辨率、高柱效：

分子傳質(zhì)速度快，蛋白或病毒顆粒可以輕松進入孔內(nèi)結(jié)合；

》非特異性吸附低：

微球表面進行親水化改性，可解決某些疏水性強的蛋白或者病毒導(dǎo)致的強吸附問題；