蛋白純化攻略 | GST標(biāo)簽蛋白純化
在蛋白純化實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，保證蛋白樣品的純度和質(zhì)量是關(guān)鍵，為了促進(jìn)蛋白的可溶性，會(huì)使用不同的標(biāo)簽，除了常用的His標(biāo)簽，GST標(biāo)簽也是純化實(shí)驗(yàn)中的明星標(biāo)簽。
關(guān)于GST標(biāo)簽蛋白及純化
GST標(biāo)簽是一種親和標(biāo)簽，能特異的與谷胱甘肽結(jié)合，表現(xiàn)為酶和底物的作用原理，利用這個(gè)原理將GST做成標(biāo)簽表達(dá)出融合蛋白，與帶谷胱甘肽的親和介質(zhì)特異性結(jié)合純化出目的蛋白，再用特異性的酶將GST標(biāo)簽切除，從而得到天然蛋白。
GST融合蛋白純化具有純度高、純化條件溫和、蛋白活性不受影響以及促進(jìn)蛋白的可溶性表達(dá)等優(yōu)勢(shì)。因此，在蛋白研究中，想獲得高可溶性蛋白，可優(yōu)先考慮GST融合表達(dá)系統(tǒng)。
GST標(biāo)簽蛋白純化方案
無(wú)論是大腸桿菌或者其他宿主細(xì)胞中，天然表達(dá)的還是重組表達(dá)的，各種來(lái)源的GST標(biāo)簽蛋白，都可以用固定的谷胱甘肽親和層析法純化，然后用過(guò)量的還原性谷胱甘肽競(jìng)爭(zhēng)洗脫。使用以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的 GST Chromrose 4FF 介質(zhì)，可以在相對(duì)較高流速的情況下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化。此介質(zhì)通過(guò)標(biāo)簽與配體結(jié)合，緩沖液洗脫去除雜質(zhì)，然后標(biāo)簽蛋白在溫和且非變性的條件下被洗脫，使得蛋白的抗原性能和功能得以保護(hù)。
產(chǎn)品測(cè)試
層析介質(zhì)：GST Chromrose 4FF
樣 品：帶 GST 標(biāo)簽的某融合蛋白
實(shí)驗(yàn)設(shè)備：5mL Xtrap GST 4FF 預(yù)裝柱、蛋白純化儀
平衡液/洗雜液：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH 7.4
洗脫液：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，10mM還原型谷胱甘肽，pH 7.4 (現(xiàn)配現(xiàn)用)
說(shuō)明：
1、3、4、5 是其他公司 GST 標(biāo)簽蛋白純化填料
2 是科諾賽生物的 GST Chromrose?4FF
從測(cè)試結(jié)果看， 在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，科諾賽生物的 GST Chromrose 4FF 產(chǎn)品載量表現(xiàn)較為突出。
產(chǎn)品介紹
GST Chromrose 4FF 是以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的親和層析介質(zhì)，操作條件溫和、特性性強(qiáng)，可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的谷胱甘膚-S -轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘依賴性蛋白和谷胱甘膚轉(zhuǎn)移酶的重組衍生物。
