His標(biāo)簽-重組蛋白純化的首選
蛋白純化標(biāo)簽的發(fā)現(xiàn)是重組蛋白純化技術(shù)的一個突破，蛋白質(zhì)純化標(biāo)簽來源多樣，市場上已有多種用途廣泛的蛋白融合標(biāo)簽，有的標(biāo)簽?zāi)艽龠M(jìn)靶蛋白溶解性增強(qiáng)，有的標(biāo)簽?zāi)軓拇痔岬纳锾崛∥镏懈咝z測和純化重組蛋白。其中His標(biāo)簽是目前重組蛋白純化中使用最廣泛的親和純化標(biāo)簽。
His標(biāo)簽-重組蛋白純化的首選
His標(biāo)簽通常是由6~10個組氨酸殘基構(gòu)成，其本身的特性對目的蛋白沒有影響，不會形成二聚體，分子量較小，只有0.84kDa，對重組蛋白的下游應(yīng)用基本沒有影響，一般情況下不需要切除；而且具有結(jié)合量高、成本低、高通用性、純化條件溫和、結(jié)合特異性高、多種上樣條件可供選擇等優(yōu)勢，在變性和非變性條件下均不影響重組蛋白的親和純化，是重組蛋白分離純化的第一選擇。
His標(biāo)簽蛋白純化解決方案
在標(biāo)簽蛋白純化過程中，合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時也不影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。His標(biāo)簽組氨酸上的N原子能夠與某些過渡金屬離子形成配位鍵，利用這一特性，可以使用含有金屬離子配基的層析填料來捕獲和純化His標(biāo)簽重組蛋白。
目前，市場上的His標(biāo)簽純化填料產(chǎn)品有很多，從填料的質(zhì)量、性能、供應(yīng)鏈等方面綜合考量，Ni Chromrose鎳離子層析填料系列性價比較高，有1mL至10L多種包裝規(guī)格，可滿足用戶從條件篩選、實(shí)驗(yàn)室研究到商業(yè)化生產(chǎn)的多樣化需求。
不同配體的Ni填料性能對比
1）Ni-IDA Chromrose 6FF / HC
Ni-IDA Chromrose 6FF / HC是由高度交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，偶聯(lián)IDA為配體，螯合鎳離子（Ni2+）制備而成的層析介質(zhì)，可以耐受最高0.3MPa的壓力，更穩(wěn)定，可在相對較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對目的蛋白的純化。如果純化的首選的是高產(chǎn)量而非純度，此款產(chǎn)品是正確的選擇。
2）Ni-NTA Chromrose 6FF / HC
Ni-NTA Chromrose 6FF / HC由高度交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，偶聯(lián)NTA為配體，螯合鎳離子（Ni2+）制備而成的層析介質(zhì)，可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等苛刻條件，配體更穩(wěn)定，耐受性強(qiáng)，鎳離子不易脫落，適合對蛋白純度要求較高的純化。
3）Ni-TED Chromrose 6FF
Ni-TED Chromrose 6FF 可耐受100mM EDTA和10mM DTT, 在含有EDTA及DTT的情況下直接進(jìn)行目的蛋白純化，更適合捕獲和純化分泌到真核表達(dá)培養(yǎng)基上清中的His標(biāo)簽蛋白，此介質(zhì)的清洗再生工作簡單，無需脫鎳直接進(jìn)行 NaOH 清洗，實(shí)驗(yàn)效率高。
應(yīng)用案例
》Ni-TED Chromrose 6FF純化實(shí)驗(yàn)：
層析介質(zhì)： Ni-TED Chromrose 6FF
樣 品： 青霉素酶發(fā)酵液
實(shí)驗(yàn)設(shè)備： 1 mL Xtrap Ni-TED FF 鎳凝膠柱、蛋白純化儀
平衡緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，PH7.4
淋洗緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，30mM 咪唑，PH7.4
洗脫緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH7.4
》Ni-TED Chromrose 6FF測試：
1 是國外知名品牌His純化瓊脂糖填料
2、3、4是國內(nèi)某品牌His純化瓊脂糖填料
5 是 Ni-TED Chromrose 6FF
6~12 是國內(nèi)品牌His純化磁珠產(chǎn)品
圖8數(shù)據(jù)表明，Ni-TED Chromrose 6FF在載量、純化效果方面表現(xiàn)較為優(yōu)秀。
綜合來看，Chromrose 鎳離子填料在純化His標(biāo)簽蛋白的應(yīng)用中效果很好，純度與收率均有保證，可在His標(biāo)簽純化中作為首選層析填料。
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