離子對色譜行為的影響

采用增加離子強度的方法洗脫蛋白質(zhì)時，通常選用某種非緩沖鹽類，zui常用的是NaCl，添加到起始緩沖液中，構(gòu)成了洗脫緩沖液。在進(jìn)行色譜分離時，洗脫緩沖液中的緩沖物質(zhì)固然會影響到色譜效果，實際上非緩沖鹽的種類和性質(zhì)同樣會影響到色譜時的分辨率和選擇性，使用不同的非緩沖鹽離子時，可能造成不同物質(zhì)被洗脫的先后順序發(fā)生變化，因此非緩沖鹽的選擇同樣具有重要意義。

在前面離子交換理論部分討論過，價態(tài)高的離子與交換劑的結(jié)合力更強，所以一般情況下，多價離子是比一價離子更好的置換離子，它們能使蛋白質(zhì)比較早被洗脫下來 （保留值?。Ｋ栽陉栯x子交換劑上，蛋白質(zhì)的保留值與置換離子的關(guān)系為：Ba2+＜Ca2+＜Mg2+＜NH4+＜K+＜Na+＜Li+，但也存在例外，比如對于溶菌酶來說，NH4+是比Mg2+更有效的置換離子。在選擇置換離子時，應(yīng)當(dāng)考慮到多方面的因素，強的置換離子能有效縮短色譜時間，但往往也降低蛋白質(zhì)回收率。一般情況下選擇置換能力居中的鹽離子較為合適，在洗脫與交換劑牢固結(jié)合的蛋白質(zhì)時，選用強的置換離子具有優(yōu)勢。

不但置換離子，洗脫鹽中與功能基團(tuán)帶同種電荷而不參與離子交換過程的離子也會影響到蛋白質(zhì)的色譜行為，原因也有多種。有些是因為離子與蛋白質(zhì)發(fā)生作用導(dǎo)致的。此外，二價離子如Ca2+和Mg2+能與蛋白質(zhì)分子中的酰胺基形成復(fù)合物而影響到其色譜行為。

總之，離子對色譜行為的影響是多方面的，沒有一定的規(guī)律。在首ci進(jìn)行色譜分離時，可優(yōu)先選擇比較通用的一些緩沖物質(zhì)和鹽類，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)一步優(yōu)化。