親和層析法分離純化動物腹水中抗體的實驗方法

基本原理： protein A和proteiin G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合。Protein A Chromrose TM4FF和Protein G ChromroseTM 4FF是專業(yè)偶聯(lián)耐堿重組Protein A和Protein G的高流速瓊脂糖層析介質(zhì)，當動物腹水從層析柱中流過時，特異性的IgG就與層析介質(zhì)中的配基結(jié)合，其他雜蛋白則穿流而過。

因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結(jié)合能力不同，我們需要具體情況具體對待，分別選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，豬的多克隆抗體用protein A純化，而小鼠單抗IgG1, 大鼠單抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

具體實驗步驟如下：

1. 根據(jù)要純化的抗體量選擇適當?shù)膶游鲋?，推薦使用HiQumnTM CTN30型中高壓層析柱（內(nèi)徑10mm）或者HiQumnTM CXK10型層析柱（內(nèi)徑16mm）或者更大的層析柱

2. 將計算過合適體積的Protein A Chromrose TM4FF或Protein G ChromroseTM 層析介質(zhì)填裝到HiQumnTM 層析柱中，接入層析系統(tǒng)進行加壓，待流動相流過3個柱體積后，將HiQumnTM 層析柱柱頭調(diào)節(jié)桿調(diào)整到層析介質(zhì)下方2-3mm處固定

3. 通過層析系統(tǒng)泵入要純化的經(jīng)預處理了的動物腹水一個柱體積，流動相為結(jié)合液。建議流速CV/5min；

5. 用5倍柱體積的結(jié)合液平衡柱子；

5. 用5-10倍柱體積的緩沖液清洗層析柱，直到?jīng)]有樣本流出；

6. 用5-10倍柱體積洗脫液洗脫層析柱，并收集抗體；

7. 將所純化的抗體加入30%-50%的甘油置于-20攝氏度或者-80攝氏度即可長期保存。

圖1. 科諾賽HiQumn CTN30-10層析柱

圖2. 科諾賽Protein A Chromrose 親和層析介質(zhì)